Приказ 26 ноября 1998 г. N 342 об усилении мероприятий по профилактике эпидемического сыпного тифа и




НазваниеПриказ 26 ноября 1998 г. N 342 об усилении мероприятий по профилактике эпидемического сыпного тифа и
страница7/11
Дата конвертации25.04.2013
Размер1.23 Mb.
ТипДокументы
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11

|---------------------------+----+----+----+----+----+----+------|

|Комплемент в различных|0,1 |0,1 |0,1 |0,1 |0,1 |0,1 | |

|разведениях (мл) | | | | | | | |

|---------------------------+----+----+----+----+----+----+------|

|Физиологический раствор|0,2 |0,2 |0,2 |0,2 |0,2 |0,2 | |

|(мл) | | | | | | | |

|---------------------------+----+----+----+----+----+----+------|

|Гемолитическая система (мл)|0,2 |0,2 |0,2 |0,2 |0,2 |0,2 | |

|---------------------------+----+----+----+----+----+----+------|

|Оценка результата | - | - | - | - | - | + | |

|----------------------------------------------------------------|

| Опытный ряд (оценка антикомплементарных свойств антигена) |

|----------------------------------------------------------------|

|Комплемент в различных|0,1 |0,1 |0,1 |0,1 |0,1 |0,1 | |

|разведениях (мл) | | | | | | | |

|---------------------------+----+----+----+----+----+----+------|

|Антиген в рабочей дозе (мл)|0,1 |0,1 |0,1 |0,1 |0,1 |0,1 | |

|---------------------------+----+----+----+----+----+----+------|

|Физиологический раствор|0,1 |0,1 |0,1 |0,1 |0,1 |0,1 | |

|(мл) | | | | | | | |

|---------------------------+----+----+----+----+----+----+------|

|Гемолитическая система <*> |0,2 |0,2 |0,2 |0,2 |0,2 |0,2 | |

|(мл) | | | | | | | |

|---------------------------+----+----+----+----+----+----+------|

|Оценка результата | - | - | - | - | + |+++ | |

+----------------------------------------------------------------+

--------------------------------

<*> - Добавляют на второй день титрования комплемента (после

16-18 часов экспозиции при температуре + 4ёС).

Дозу комплемента с антигеном, дающую полный гемолиз, считают

за титр комплемента или \"полную единицу\", в данном примере она

соответствует разведению комплемента 1:20. Раз оттитрованной

рабочей дозой комплемента можно пользоваться в течение месяца при

работе с этой серией комплемента и эритроцитов.

После 30-минутной экспозиции при температуре +37ёС учитывают

результаты.

При постановке реакции \"холодным методом\" (0ёС) рабочая доза

комплемента соответствует двум полным единицам в виде удвоенного

объема комплемента - 0,2 мл. Например, полный гемолиз в опытном

ряду, т.е. в присутствии антигена, отмечен в пробирке при

разведении комплемента 1:20, а в контрольном ряду - 1:25. В итоге

рабочая доза комплемента при использовании в реакции данного

антигена соответствует разведению 1:20 в объеме 0,2 мл, поскольку

в этих условиях не выявляются антикомплементарные свойства

антигена. Например, на 100 пробирок необходимо приготовить 20 мл

разведенного 1:20 комплемента (из расчета 0,2 мл на пробирку),

следовательно, нужно взять 1,0 мл цельного комплемента и 19,0 мл

физиологического раствора.

В случае, если в реакции используют не 1, а 2 или 3 разного

вида антигенов, то и титрование комплемента проводят в присутствии

всех видов антигенов, после чего выбирают соответствующие дозы

комплемента.

При постановке реакции при +37ёС рабочая доза комплемента

составит 1 полную единицу, т.е. объем его не 0,2, а 0,1 мл и общий

объем РСК в этом случае будет 0,5 мл.

В основном опыте контролируют рабочую дозу комплемента, полную

единицу комплемента и ее половину (\"холодное\" связывание) или

полную единицу комплемента и ее половину (связывание при +37ёС).

Иными словами, в первом случае: 0,2 мл комплемента в рабочей дозе

+ 0,2 мл физиологического раствора; 0,1 мл комплемента в рабочей

дозе + 0,3 мл физиологического раствора, и 0,05 мл комплемента в

рабочей дозе + 0,35 мл физиологического раствора. В 1 и 2-ом

контролях должен наблюдаться полный гемолиз, в 3-ем - задержка его

на три-два креста. Во 2-м случае (т.е. связывание при +37ёС) для

контроля используют 2 последние дозы.

Постановка основного опыта.

Инактивированные испытуемые сыворотки разводят физиологическим

раствором и разливают в пробирки (или лунки полистероловых

панелей) по 0,1 мл. К различным разведениям исследуемых сывороток

добавляют по 0,1 мл антигена и 0,2 мл комплемента в его рабочей

дозе.

Каждый опыт должен сопровождаться следующими контролями:

1} контроль всех испытуемых сывороток (0,1 мл сывороток, в

исходном разведении + 0,2 мл комплемента в рабочей дозе + 0,1 мл

физиологического раствора);

2} контроль антигена (0,1 мл антигена + 0,2 мл комплемента в

рабочей дозе + 0,1 мл физиологического раствора);

3} контроль комплемента (как указано выше);

4} контроль гемолитической системы (0,4 мл физиологического

раствора).

Кроме того, необходимо в качестве контроля вводить в опыт

заведомо положительную и отрицательную сыворотки с их контролями.

Положительную сыворотку разводят до ее титра. После тщательного

встряхивания пробирки ставят в холодильник при 0ёС на 16-20 часов

(1-й этап реакции, таблица 6).

Таблица 6

СХЕМА ПОСТАНОВКИ ОСНОВНОГО ОПЫТА РСК

+-------------------------------------------------------------------------+

| | Разведение сывороток |Конт-|Конт-|Конт-|Конт-|

|Ингредиенты| |роль |роль |роль |роль |

| реакции |-------------------------------------|сыв. |анти-|ком- |гем. |

| |1:10|1:20|1:40|1:80|1:160|1:320|1:640| |гена |плем.|сист.|

|-------------------------------------------------------------------------|

| 1-й этап |

|-------------------------------------------------------------------------|

|Сыворотка | |0,1 |0,1 |0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | - | - | - |

|(мл) | | | | | | | | | | | |

|-----------+----+----+----+----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----|

|Антиген | |0,1 |0,1 |0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | - | 0,1 | - | - |

|(мл) | | | | | | | | | | | |

|-----------+----+----+----+----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----|

|Комплемент | |0,2 |0,2 |0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | - |

|(мл) | | | | | | | | | | | |

|-----------+----+----+----+----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----|

|Физиологи- | | - | - | - | - | - | - | 0,1 | 0,1 | 0,2 | - |

|ческий | | | | | | | | | | | |

|раствор | | | | | | | | | | | |

|(мл) | | | | | | | | | | | |

|-------------------------------------------------------------------------|

| Экспозиция 16-20 часов при + 4ёС |

|-------------------------------------------------------------------------|

| 2-й этап |

|-------------------------------------------------------------------------|

|Гемолитиче-|0,2 |0,2 |0,2 |0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 |

|ская систе-| | | | | | | | | | | |

|ма (мл) | | | | | | | | | | | |

|-----------+----+----+----+----+-----+-----+-----+-----+-----+-----+-----|

|Физиологи- | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0,4 |

|ческий | | | | | | | | | | | |

|раствор | | | | | | | | | | | |

|(мл) | | | | | | | | | | | |

|-------------------------------------------------------------------------|

| Экспозиция 20-30 минут при + 37ёС |

+-------------------------------------------------------------------------+

На втором этапе в каждую пробирку или лунку панелей добавляют

по 0,2 мл гемолитической системы, предварительно выдержанной в

термостате при + 37ёС 30 минут. Пробирки или панели тщательно

встряхивают и ставят в термостат на 20-30 минут в зависимости от

гемолиза эритроцитов в контролях. В пробирки с заведомо

положительной сывороткой и в контроле гемолитической системы

должна наблюдаться задержка гемолиза.

Оценка главного опыта заключается в степени задержки гемолиза

в пробирках с испытуемыми сыворотками по сравнению с

соответствующими контролями, в которых возник полный гемолиз.

Титром сыворотки считают наибольшее ее разведение,

характеризующееся задержкой гемолиза не менее чем на три креста.

Результаты реакции считают достоверными, если в контролях

испытуемых сывороток, в контроле антигена и рабочей дозе

комплемента имеется полный гемолиз, а в контроле гемолитической

системы гемолиз отсутствует. Диагностический титр может считаться

1:10 при условии нарастания титра в 4 раза (и более) с интервалом

в 7 дней.

В РСК оба ингредиента используются в дозе, равной 1 ЕД. Дозы

определяют путем перекрестного (\"шахматного\") титрования.

2.4. Реакция агглютинации с риккетсиями Провачека (РА).

Реакция агглютинации (РА) является наиболее простым тестом и

может быть применена для лабораторной диагностики не только

сыпного тифа, но и большинства риккетсиозов. Вместе с тем для ее

постановки необходимы дорогостоящие тщательно очищенные

корпускулярные риккетсиальные антигены.

Ее преимуществом является минимальное число компонентов

реакции (исследуемая сыворотка и антигенный диагностикум) и более

раннее выявление агглютининов.

Метод обладает, вместе с тем, существенными недостатками:

1) для исследований пригодны только свежие негемолизированные

сыворотки, хранящиеся не более 14 дней;

2) затруднена ретроспективная диагностика, поскольку

агглютинины выявляются менее продолжительное время после болезни;

3) в случае использования бесцветного антигена - субъективизм

при оценке результатов.

Ингредиенты реакции: 1) исследуемая инактивированная при +56ёС

в течение 30 минут прозрачная, свежая сыворотка, 2) корпускулярный

антиген, 3) физиологический раствор.

РАР выполняется в макро- (0,4 мл; 6 капель - по Мосингу) и

микровариантах (0,05 мл) всегда объемным способом, что ведет к

разбавлению вдвое начального разведения сыворотки (например,

сыворотка, разведенная 1:10 в объеме 3 капель, при добавлении

антигена в объеме 3-х капель будет иметь разведение 1:20).

Для микроварианта РА используют бесцветные корпускулярные

антигены, которые разводят согласно этикетке на ампуле, и жидкий

антиген коричневого цвета, приготовленный из риккетсий Провачека,

культивируемых в кишечнике вшей (для РАР может быть использован

также сухой люминесцирующий диагностикум из риккетсий для ИФРМА).

Постановка РА. Макровариант.

Готовят в агглютинационных пробирках или пластинах

последовательные двукратные разведения исследуемой сыворотки с 1:5

в объеме 0,2 мл или 3-х капель. С этой целью вносят во все

пробирки, кроме первой, по 0,2 мл физиологического раствора (или

по 3 капли). В отдельной пробирке или лунке готовят исходное

разведение сыворотки (1:5), т.е. 0,1 мл сыворотки + соответственно

0,4 мл физиологического раствора. Из него 0,2 мл (3 капли) вносят

в первую пробирку или лунку, 0,2 мл (3 капли) - во вторую и 0,2 мл

(3 капли) - в контрольную. Затем из 2-й пробирки после

перемешивания сыворотки и физиологического раствора 0,2 мл (3

капли) переносят в следующую и так до конечного разведения. Первое

разведение сыворотки (1:5) после добавления антигена будет

соответствовать 1:10, о чем делается надпись на пробирке или лунке.

После окончания разведения всех сывороток во все разведения

сывороток добавляют антиген (за исключением контроля сыворотки) по

0,2 мл (3 капли), встряхивают штативы с пробирками или панели

(продувая воздух в пластины из пипетки) и оставляют на 16-18 часов

при +37ёС (пластины покрывают стеклом во избежание подсыхания

ингредиентов).

Постановка РА предусматривает контроль каждой исследуемой

сыворотки: 0,2 мл (3 капли) начального ее разведения + 0,2 мл (3

капли) растворителя; контроль антигена: 0,2 мл (3 капли) антигена

+ 0,2 мл (3 капли) растворителя, а также ставят контроль

стандартной специфической сыворотки с известным титром антител.

Последнюю разводят на одно разведение выше указанного на этикетке

титра (табл. 7).

Таблица 7

СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ

+----------------------------------------------------------------+

| Ингредиенты | Разведения исследуемой сыворотки | Контроли |

| |-------------------------------------+-----------|

| |1:10|1:20|1:40|1:80|1:160|1:320|1:640|сыво-|анти-|

| | | | | | | | |ротки|гена |

|--------------+----+----+----+----+-----+-----+-----+-----+-----|

|Сыворотка (мл)|0,2 |0,2 |0,2 |0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | - |

|--------------+----+----+----+----+-----+-----+-----+-----+-----|

|Антиген (мл) |0,2 |0,2 |0,2 |0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | - | 0,2 |

|--------------+----+----+----+----+-----+-----+-----+-----+-----|

|Физ. раствор | - | - | - | - | - | - | - | 0,2 | 0,2 |

|(мл) | | | | | | | | | |

+----------------------------------------------------------------+

После термостата штативы выдерживают два часа при комнатной

температуре, не встряхивая пробирки, поскольку образуемый

агглютинат имеет вид нежного перевернутого зонтика и очень легко

разрушается. После этого учитывают результаты реакции.

Учет результатов.

Результаты реакции учитываются невооруженным глазом или с

помощью агглютиноскопа по 4-х крестной системе:

- полное просветление жидкости над осадком, имеющим вид

перевернутого зонтика - четыре креста (++++);

- неполное просветление жидкости над таким же осадком - три

креста (+++);

- мутная жидкость при наличии небольшого зернистого осадка на

дне и стенках пробирки - два креста (++);

- мутная жидкость, возможен осадок в виде точки - один крест

(+).

Реакция считается положительной при наличии интенсивности

агглютинации риккетсий на три креста в конечном разведении; в

контролях сывороток и антигена не должно быть агглютинации, а титр

стандартной сыворотки должен соответствовать указанному на

этикетке (допускается изменение титра на одно разведение).

2.5. Определение специфических антител к риккетсиям Провачека

иммуноферментным методом.

Принцип иммуноферментного анализа (ИФА) основан на образовании

иммунного комплекса специфических антител с антигеном,

иммобилизированном на полистероловом планшете, с последующим его

выявлением антивидовым коньюгатом, меченым ферментом.

Ферментативная активность пропорциональна содержанию специфических
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   11

Похожие:

Приказ 26 ноября 1998 г. N 342 об усилении мероприятий по профилактике эпидемического сыпного тифа и iconПриказ Минздрава РФ от 26 ноября 1998 г. N 342 "Об усилении мероприятий по профилактике эпидемического сыпного тифа и борьбе с педикулезом"
В связи с высоким уровнем пораженности населения педикулезом, в том числе платяным, в Российской Федерации сохраняются реальные предпосылки...
Приказ 26 ноября 1998 г. N 342 об усилении мероприятий по профилактике эпидемического сыпного тифа и iconКалендарный план основных мероприятий мэрии города Ярославля с 26 ноября по 02 декабря 2012 года 26 ноября, понедельник
«Энергия жизни» программа по профилактике употребления энергетических напитков
Приказ 26 ноября 1998 г. N 342 об усилении мероприятий по профилактике эпидемического сыпного тифа и iconПриказ Минфина РФ от 25 ноября 1998 г. N 56н "Об утверждении Положения по бухгалтерскому учету "События после отчетной даты" (пбу 7/98)"
Правительства Российской Федерации от 6 марта 1998 г. N 283, и во исполнение распоряжения Правительства Российской Федерации от 22...
Приказ 26 ноября 1998 г. N 342 об усилении мероприятий по профилактике эпидемического сыпного тифа и iconПриказ от 26 ноября 1997 г. N 345 о совершенствовании мероприятий по профилактике внутрибольничных инфекций в акушерских
Федеральной целевой программы "Безопасное материнство", утвержденной Постановлением Правительства Российской Федерации от 14. 10....
Приказ 26 ноября 1998 г. N 342 об усилении мероприятий по профилактике эпидемического сыпного тифа и iconПриказ от 31 июля 2009 г. N 547 о совершенствовании мероприятий по профилактике острых респираторных заболеваний и готовности к
Согласно информации Всемирной организации здравоохранения (воз) среди людей начиная с
Приказ 26 ноября 1998 г. N 342 об усилении мероприятий по профилактике эпидемического сыпного тифа и iconПриказ от 29 апреля 1998 г. N 142 о перечне видов медицинской деятельности, подлежащих лицензированию Зарегистрировано в Минюсте РФ 25 мая 1998 г. N 1525
Бюллетень нормативных актов федеральных органов исполнительной власти, n 12, 1998
Приказ 26 ноября 1998 г. N 342 об усилении мероприятий по профилактике эпидемического сыпного тифа и iconПеречень распоряжений губернатора санкт-петербурга, принятых с 1 ноября 1998 Г. По 30 ноября 1998 Г
О подготовке к участию делегации Санкт-Петербурга в выставке "Инвестиции в недвижимость "mipim-99"
Приказ 26 ноября 1998 г. N 342 об усилении мероприятий по профилактике эпидемического сыпного тифа и iconНаграды и поощрения: Школьные благодарности
...
Приказ 26 ноября 1998 г. N 342 об усилении мероприятий по профилактике эпидемического сыпного тифа и iconАлтайского края п о с т а н о вление
Об усилении противопожарной защиты города и осуществлении противопожарных мероприятий в осеннее-зимний период 2006-2007гг
Приказ 26 ноября 1998 г. N 342 об усилении мероприятий по профилактике эпидемического сыпного тифа и iconПриказ Минздрава РФ от 7 октября 1997 г. N 297 "О совершенствовании мероприятий по профилактике заболевания людей бешенством"
В связи с обострением в последние годы на территории Российской Федерации эпизоотологической обстановки по бешенству значительно...
Разместите кнопку на своём сайте:
Библиотека


База данных защищена авторским правом ©tnu.podelise.ru 2013
обратиться к администрации
Библиотека
Главная страница