Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии»




НазваниеМетодические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии»
страница1/5
Дата конвертации19.11.2013
Размер0.63 Mb.
ТипМетодические указания
  1   2   3   4   5


Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование

Российской Федерации



4.2. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ, ОБНАРУЖЕНИЕ САЛЬМОНЕЛЛ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ


Методические указания


МУ 4.2.2723-10


Издание официальное


Москва - 2010 г.


4.2. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ, ОБНАРУЖЕНИЕ САЛЬМОНЕЛЛ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ


Методические указания


1. Методические указания разработаны ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора (С.Ш.Рожнова, А.Т.Подколзин).

2. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 13.08.2010 г.

3. Введены впервые взамен МУ «Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды», 1990 г.


Содержание


1. Область применения ……………………………………………... 6

2. Термины и сокращения ………………………………………….. 8

3. Нормативные ссылки ……………………………………………. .9

4. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда и реактивы…….10

4.1. Аппаратура и инструментарий…………………………..10

4.2. Лабораторная посуда и материалы………………………11

4.3. Реактивы и питательные среды…………………………..12

5. Средства измерения и вспомогательное оборудование, посуда

и реактивы…………………………………………………………….13

5.1. Средства измерений и вспомогательное оборудование..13

5.2. Лабораторная посуда и инструменты……………………14

5.3. Перечень рекомендуемого оборудования для проведения

ПЦР-исследования……………………………………………………14


6. Общие положения ………………………………………………....16

7. Показания к исследованию …………………………………….....21


8. Исследование клинического материала…………. ………………21

8.1. Взятие и транспортировка……………………………………21

8.2. Подготовка к исследованию……………………………….....24

8.3. Методы выделения……………………………………………24

9. Исследование пищевых продуктов………………………………..27

9.1. Взятие проб и их транспортировка…………………………..27

9.2. Подготовка к исследованию………………………………….29

9.3. Методы выделения……………………………………………29


10. Исследование объектов окружающей среды……………..............30

10.1 Взятие проб и их транспортировка…………………………...31

10.2. Подготовка к исследованию………………………………….32

10.3. Методы выделения……………………………………………32


11. Идентификация сальмонелл……………………………………….33

11.1. Определение ферментативных свойств выделенных микроорганизмов………………………………………………………………33

11.2. Определение О-антигенов выделенных микроорганизмов….35

11.3. Определение Н-антигенов выделенных микроорганизмов….36

11.4. Определение биоваров сальмонелл……………………………38


12. Использование серологических методов исследования для диагностики сальмонеллезов и выявления различных форм бактерионосительства………………………………………………………….40

12.1 Постановка РПГА ……………………………………………….42

12.2 Определение антител в РПГА без цистеина…………………...42

12.3 Определение антител в РПГА с цистеином……………………43

12.4 Учет РПГА и интерпретация результатов……………………..43


13. Молекулярно-генетические методы исследования………………44

13.1 Обнаружение ДНК микроорганизмов рода Salmonella в различных видах клинического, биологического материала и продуктах питания…………………………………………………………………………46

13.2 Оценка идентичности ДНК микроорганизмов рода Salmonella, выделенных из различных источников…………………………………...47


Приложения………………………………………………………….... .50






УТВЕРЖДАЮ




Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации









Г.Г.Онищенко




13.08.2010 г.

Дата введения: 2.09.2010 г.


4.2. Биологические и микробиологические факторы


ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ, ОБНАРУЖЕНИЕ САЛЬМОНЕЛЛ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ


Методические указания

МУ 4.2.2723-10

_________________________________________________


I. Область применения


1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы специалистами организаций здравоохранения и других заинтересованных организаций.

1.2. В настоящих методических указаниях определен порядок проведения лабораторных исследований в целях обнаружения сальмонелл в клиническом материале, пищевых продуктах и объектах окружающей среды.


1.3. Настоящие методические указания распространяются только на лаборатории, имеющие право на работу с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и удовлетворяющие требованиям к помещениям и оборудованию в соответствии с СанПиН 1.3.2322-08.


2. Термины и сокращения


ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота

ПЦР – полимеразная цепная реакция

Н-антиген – жгутиковый антиген, представляющий собой термолабильный белок

О-антиген – соматический антиген, представляющий собой липополисахарид клеточных мембран

Смесь О-сывороток - диагностические адсорбированные сыворотки сальмонеллезные

R-форма – шероховатая форма

RAPD – амплификация с произвольными (случайными) праймерами

ISO-6579 – международная организация стандартизации

MLST - мультилокусное секвенирование-типирование

PFGE – электрофорез в пульсирующем поле

VNTR – амплификация тандемных повторов с переменной копийностью

S-форма - гладкая форма

SS-агар – сальмонелла-шигелла агар

РПГА – реакция пассивной гемагглютинации

AFLP – оценка полиморфизма длины фрагментов амплификации


3. Нормативные ссылки


МУ по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями – 1984 г.

МУ «Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды» - 1990 г.

ГОСТ Р 52814-2007 (ИСО 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella.

ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологического анализа.

ГОСТ 26669-85. Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологического анализа.

ГОСТ Р 50455-92 Мясо и мясные продукты. Обнаружение сальмонелл (арбитражный метод).

ГОСТ Р 51448-99 (ИСО 3100-2-88) Мясо и мясные продукты. Методы подготовки проб для микробиологических исследований.

ГОСТ 9792-73 «Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб».

ГОСТ 7702.20-95 «Субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб».

ГОСТ р52833-2007 (ИСО 22174-2005). Микробиология пищевой продукции и кормов для животных. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Общие требования и определения.

ГОСТ 30705-2000 «Продукты молочные для детского питания. Методы микробиологического анализа».

МУ 4.2.1884-04 Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов.

МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов».

МУ 1.3.1888-04 «Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III-IV групп патогенности».

Информационное письмо МЗ РСФСР № 10/11-3223 от 28.08.1987 г.

«Методы контроля бактериологических питательных сред». Методические указания. МУК 4.2.2316-08

«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08.

«Методы контроля. Бактериологические и микробиологические факторы. Техника сбора и транспортировки биоматериала в микробиологические лаборатории» МУ 4.2.2039-05

Инструкция по применению набора реагентов «Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный О-антигенный жидкий» от 22.08.2008 № 6854-Пр/08

«Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» СанПиН 2.3.2.1078-01

«Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений» СП.2.1.7.728-99.

Приказ № 535 от 22 апреля 1985 г. «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений»

Laboratory Protocol «Isolation of Salmonella spp. From Food and Animal Faeces» 5thEd June 2010. WHO Global Foodborhe Infections Network.

Antigenic formulae of the Salmonella serovars, 2007, 9th edition WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Salmonellа.


4. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы

4.1. Аппаратура и инструментарий



Наименование аппаратуры и материалов

Названия нормативных документов (ГОСТ, ТУ)

Анализатор потенциометрический, погреш­ность измерений рН ± 0,01

ГОСТ 19881-74

Шкаф сушильный стерилизационный ШСС-80П или других марок, позволяющий поддер­живать температуру (160 ± 5) °С

ТУ 64-1-28-70-76

Термостат, позволяющий поддерживать рабо­чую температуру 37 °С с отклонением от за­данной ± 1 °С


ТУ 64-1-1382-83


Термостат, позволяющий поддерживать рабо­чую температуру 41,5 °С с отклонением от за­данной ± 1 °С

ТУ 64-1-1382-83



Весы лабораторные общего назначения, 2 и 4 класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г

ГОСТ 24104-88


Микроскоп биологический МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, МБР-1, МБР-3, МБС

ГОСТ 8284-78


Стерилизаторы паровые медицинские или аналогичные

ГОСТ 19569-89Е

Дистиллятор, обеспечивающий качество дис­тиллированной воды в соответствии с

ГОСТ 6709-72

Гомогенизатор перистальтического типа «Микс-2» , «Стомайкер», или других наименований

AES Lab., Cat.N AESAP 1066

Гомогенизатор типа «вортекс»




Микропипетки на 200-1000 мкл

BIOHIT, Cat.N 720040 или «Ленпипет»

Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 или других видов

ТУ-16-535-84


Холодильник бытовой электрический

ГОСТ 16317-87

Пинцет медицинский

ГОСТ 21241-89

Ножницы медицинские

ГОСТ 21239-89

Скальпель хирургический, 15см


ГОСТ 21240-89

Часы механические сигнальные

ГОСТ 3145-84

Электроплитка

ГОСТ 14919-83

Аппарат универсальный для встряхивания жидкости в колбах и пробирках (или другая аппаратура для встряхивания)

ТУ 64-1-2451-78




4.2. Лабораторная посуда и материалы


Бумага фильтровальная лабораторная

ГОСТ 12026-76

Марля медицинская


ГОСТ 9412-77


Колбы плоскодонные конические или круглые

разной вместимости

ГОСТ 1770-74


Воронки стеклянные

ГОСТ 25336-82

Вата медицинская гигроскопическая

ГОСТ 5556-81

Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 см3

ГОСТ 29227-91

Пробирки типов П1, П2

ГОСТ 25336-82

Стекла предметные для микропрепаратов

ГОСТ 6672-75

Спиртовки лабораторные стеклянные

ГОСТ 23932-90

Термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 до 100 °С (цена деления шкалы 1 °С)


ГОСТ 13646-68

Чашки биологические (Петри) или одноразовые из полимерных материалов

ГОСТ 23932-90

Пакеты стерильные для гомогенизатора

AES Lab., Cat.N AES400/50G


Отраслевой стандарт для визуальной оценки мутности № 10

ГИСК им. Л.А. Тарасевича, МЗ РФ


Стандарт Макфарланда №№ 1, 2, 3

ф. «BioMerieux»

Петля бактериологическая





4.3. Реактивы и питательные среды


Агар микробиологический

ГОСТ 17206—84

Вода дистиллированная

ГОСТ 6709—72

D-глюкоза, ч.

ГОСТ 6038—79

D-лактоза, 1-водная

ТУ 6—09—22—98—79

Маннит




D-сорбит




Рамноза




Калия гидроокись

ГОСТ 24363—80

Калий фосфорнокислый однозамещенный, ч.

ГОСТ 4198—75

Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный

ГОСТ 2493—75

Кислота соляная, х. ч.

ГОСТ 3118—77

Литий хлористый, ч. или х. ч., или ч, д. а.

ГОСТ 4328-77

Масло иммерсионное для микроскопии

ГОСТ 31739-78

Набор реактивов для окраски по Граму




Натрий-аммоний фосфорнокислый двузаме­щенный, 4-водный, ч. или х. ч.

ГОСТ 4170-78

Натрия гидроокись, ч. д. а.

ГОСТ 4328—77

Натрий лимоннокислый, 5,5-водный, ч. д. а.

ГОСТ 22280—75

Натрий хлористый, ч. или х. ч., или ч. д. а.

ГОСТ 4233-77

Пара-диметиламидобензальдегид, ч.

ТУ 6—09—3272-77

Пептон сухой ферментативный для бактерио­логических целей

ГОСТ 13805--76

Спирт этиловый ректификованный технический

ГОСТ 18300—87

Спирт этиловый ректификованный

ГОСТ 5962—67

Феноловый красный

ГОСТ 5853—51

Фенолфталеин

ГОСТ 5850—72

Фуксин основной

ТУ 6—09—4119—75

Уксусная кислота

ГОСТ 61—75

Сульфаниловая кислота




α-нафтол




Цинк порошкообразный

ГОСТ 3640

Экстракт дрожжевой сухой




Пептонная вода забуференная –(сухая)




Питательный бульон и питательный агар

ТУ 10—02—02—789—176—94

Среды Гисса с глюкозой, лактозой, маннитом, рамнозой, дульцитом, адонитом, сахарозой, сорбитом

ФС (ЦНИИВС им. И. И. Мечникова, НИИ питательных сред)

Среда Эндо

ТУ 9229-072-00419785

Среда Кесслер с глюкозой

ГОСТ 30519-97

Тест-системы биохимические для видовой
идентификации API 20Е, Rapid 20E, ID 32E для идентификации Enterobacteriaceae и других грамотрицательных палочек

BioMerieux

Набор реактивов для окраски по Граму





5. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ, ПОСУДА, РЕАКТИВЫ


5.1. Средства измерений и вспомогательное оборудование


5.1.1. Центрифуга лабораторная

5.1.2. Шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий постоянство температуры (130 + 5 )оС по НД

5.1.3. Шкаф холодильный любого типа, обеспечивающий постоянство температуры по НД

5.1.4. Весы лабораторные аналитические общего назначения и образцовые по ГОСТ 24104-88 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, не ниже 2 –го класса точности

5.1.5. Дозаторы пипеточные по ТУ 64-16-55-90 с диапазоном объема доз 20-200 мкл, 200-1000 мкл и дискретности установки доз 5 мкл

5.1.6. Дистиллятор тип ДЭ-4-2 по НД

5.1.7. рН-метр по НД

5.1.8. Гомогенизатор ножевой или перистальтический типа «Стомайкер»

5.1.9. Ступки фарфоровые с пестиками

5.2. Лабораторная посуда и инструменты

5.2.1. Посуда мерная лабораторная по ГОСТ 1770-74; цилиндры исполнения 2 вместимостью 1000 см3, цилиндры исполнения 3 вместимостью 25 см3 и 100 см3 , пробирки исполнения 1 вместимостью 10 см3 , колбы исполнения 2 вместимостью 100 см3 , 500 см3 и 1000 см3.

5.2.2.. Пипетки 2-1-50 или 2-2 –50 по ГОСТ 20292-74

5.2.3. Посуда лабораторная стеклянная по ГОСТ 25336-82 ; колбы конические вместимостью 50 -:- 1000 см3.

5.2.4. Пинцеты, скальпели, ножницы.

5.2.5. Автоматические пипетки на 50, 100 мкл и 1 мл, с наконечниками


5.3.Перечень рекомендуемого оборудования для проведения ПЦР-исследований1


5.3.1.Ламинарный бокс (например, «БАВп-01-«Ламинар-С»-1,2», «Ламинарные системы», Россия, класс биологической безопасности II тип А).

5.3.2.Программируемый амплификатор (например, «Терцик» («ДНК-Технология», Россия), «Gradient Palm Cycler» («Corbett Research», Австралия), «MAXYGENE» («Axygen», США), «GeneAmp PCR System 2700» («Applied Biosystems») или аналогичные).

5.3.3.Программируемый амплификатор с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени» – при работе с «ПЦР-комплект» вариант FRT (например, «Rotor-Gene» 3000/6000 («Corbett Research», Австралия), «Rotor-Gene Q» («Qiagen», Германия), «iQ5» («Bio-Rad», США), «Mx3000P» («Stratagene», США), «ДТ-96» («ДНК-Технология», Россия) или аналогичные).

5.3.4.Флуоресцентный ПЦР-детектор (например, «AЛА-1/4» («BioSan», Латвия), «Джин» («ДНК-Технология», Россия) или аналогичные).

5.3.5.Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100 °С (например, «ТЕРМО 24-15», «Биоком», Россия).

5.3.6.Микроцентрифуга для пробирок типа «Эппендорф» до 16 тыс об/мин (например, «MiniSpin», «Eppendorf», Германия).

5.3.7.Вортекс (например, «ТЭТА-2», «Биоком», Россия).

5.3.8.Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления надосадочной жидкости (например, «ОМ-1», г. Ульяновск, Россия).

5.3.9.Набор электронных или механических дозаторов переменного объема (например, «Ленпипет», Россия).

5.3.10.Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся микропробирки на 1,5 мл (например, «Axygen», США).

5.3.11.Штативы для наконечников (например, «Axygen», США) и микропробирок на 1,5 мл (например, «ИнтерЛабСервис», Россия).

5.3.12.Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл (например, «Axygen», США).

5.3.13.Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с аэрозольным барьером до 200 мкл и до 1000 мкл (например, «Axygen», США).

5.3.14.Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой не выше минус 16 °С.

5.3.15.Отдельный халат и одноразовые перчатки.

5.3.16.Емкость с дезинфицирующим раствором.

5.3.17.Камера для горизонтального электрофореза объёмом не более 400 мл (например, «SE-2», «Хеликон», Россия).

5.3.18.Источник постоянного тока с напряжением 150-460 В (например, «Эльф-4», «ДНК-Технология», Россия).

5.3.19.Ультрафиолетовый трансиллюминатор с кабинетом для просмотра гелей (например, «Биоком», Россия).

5.3.20.Видеосистема с цифровой камерой для регистрации результатов и передачи изображения (например, «Биотест-1», ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Россия; «BioRad», США).

5.3.21.Аквадистиллятор. (например ДЭ-4-2Э, Завод медицинского оборудования, г.Саранск.)

5.3.22.Микроволновая печь для плавления агарозы.

5.3.23.Колба коническая из термостойкого стекла (ГОСТ 21400-75) для плавления агарозы на 250 мл.

5.3.24.Мерный цилиндр на 1 л (ГОСТ 1770-74).

5.3.25.Пластиковая ёмкость на 5 л для дезактивации буфера и гелей, содержащих бромид этидия.
  1   2   3   4   5

Похожие:

Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconВременные методические указания к изучению санитарных
Настоящие Методические указания разработаны в соответствии с планом гкнт по проблеме
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания по дисциплине «физические основы оптической связи»
Методические указания разработаны кандидатом физико-математических наук, доцентом Нойкиным Ю. М
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания к спецкурсу «Основы психолингвистики»
Методические указания разработаны кандидатом филологических наук, доцентом кафедры русского языка Ф. Г. Самигулиной
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания по курсу «Ландшафты мира и проблемы природопользования» (часть 1) по специальности 013600 Геоэкология
...
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания по чтению текстов на испанском языке о древних культурах центральной и южной Америки для студентов философов и культурологов
Методические указания разработаны преп кафедры французского и испанского языков Родригес А. Э
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconУтверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды (методические указания)
Методические указания разработаны: Всесоюзным центром по сальмонеллам Центрального
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания по оценке подлинности и выявлению фальсификации молочной продукции
«Методические указания по оценке подлинности и выявлению фальсификации молочной продукции». Методические указания. – М.: Федеральный...
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания му 5 705-98 "Борьба с комарами, выплаживающимися в подвальных помещениях"
Методические указания разработаны для внедрения и применения Санитарных правил и норм СанПиН 5 541-96 "Требования к организации и...
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания разработаны на кафедре «Иностранные языки»
Английский язык. Грамматика. Сборник упражнений : методические указания для изучения грамматических основ английского языка для студентов...
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Разместите кнопку на своём сайте:
Библиотека


База данных защищена авторским правом ©tnu.podelise.ru 2013
обратиться к администрации
Библиотека
Главная страница