Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии»




НазваниеМетодические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии»
страница5/5
Дата конвертации19.11.2013
Размер0.63 Mb.
ТипМетодические указания
1   2   3   4   5

13. Молекулярно-генетические методы исследования



Все работы, связанные с применением молекулярно-генетических методов при исследовании материала, содержащего микроорганизмы рода Salmonella, проводятся с соблюдением санитарно-эпидемических правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III – IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СП 2.1.7.728-99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений» и методических указаний МУ 1.3.1888-04 «Организация работы при исследованиях метолом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III – IV групп патогенности».

Молекулярно-генетические методы исследования в отношении микроорганизмов рода Salmonella обладают рядом особенностей, которые необходимо учитывать при определении оптимальной области их применения и правильной интерпретации получаемых результатов:

  • Объектом детекции является ДНК возбудителя, обнаружение которой не является доказательством жизнеспособности микроорганизма.

  • Аналитическая чувствительность различных тест-систем на основе метода ПЦР колеблется в пределах 100-500 бактериальных клеток/мл, и в ряде случаев может уступать аналитической чувствительности микробиологического исследования с использованием сред селективного обогащения.

  • При работе с продуктами питания обнаружение ДНК сальмонелл требует дополнительного микробиологического исследования для выявления культуры возбудителя.

  • При работе с клиническим материалом обнаружение ДНК сальмонелл может использоваться в качестве скринингового диагностического теста при групповой заболеваемости сальмонеллезом и у пациентов с антибактериальной терапией, начатой до первичного лабораторного исследования.

  • Возможность обнаружения нежизнеспособных микроорганизмов дает возможность результативного исследования образцов при неинформативности микробиологического метода (продукты питания после термической обработки, с нарушенными сроками хранения, клинические образцы от пациентов после применения ими антибактериальных препаратов). Спектр специфичности коммерчески доступных тест-систем на основе метода ПЦР позволяет выявлять все микроорганизмы рода сальмонелл, включая и возбудителей тифо-паратифозных заболеваний без серогрупповой дифференцировки между ними.

  • Различные методы оценки идентичности ДНК микроорганизмов рода Salmonella, выделенных из различных источников, имеют максимальную информативность при их использовании на чистых культурах, выделенных при первичном исследовании образцов.


13.1 Обнаружение ДНК микроорганизмов рода Salmonella в различных видах клинического, биологического материала и продуктах питания

Для выявления ДНК микроорганизмов рода Salmonella в клиническом и биологическом материале используются диагностические тест-системы, разрешенные к применению на территории РФ в установленном порядке. Предпочтение при этом должно отдаваться диагностическим тест-системам, обладающим максимальной степенью контаминационной безопасности (тест-системы с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени или по конечной точке).

Клинический материал для исследования (образцы фекалий, рвотные массы, желчь) следует забирать, исключая его возможную контаминацию ДНК, содержащейся в продезинфицированной посуде (использовать стерильные чашки Петри, одноразовые пластиковые пакеты, подкладываемые в судно перед дефекацией, производить забор фекалий из памперсов или в автоклавированую для разрушения остаточной ДНК многоразовую посуду).

При одновременном проведении молекулярно-генетического и микробиологического исследований возможен унифицированный забор клинического материала и образцов продуктов питания в соответствии с рекомендациями, представленными в соответствующем разделе. При невозможности исследования нативных фекалий возможно их хранение с использованием глицеринового консерванта. Для проведения молекулярно-генетических исследований при длительном хранении допускается замораживание образцов в данном консерванте. Забор материала проводится в объеме 2-5 мл.

Условия и сроки хранения и транспортировки клинического материала, а также метода его предварительной обработки определяются инструкцией к используемой диагностической тест-системе.

Выделение ДНК микроорганизмов рода Salmonella из образцов продуктов питания проводят после предварительного обогащения образца в соответствии с рекомендациями, представленными в разделе, описывающем микробиологические исследования. Дальнейшее выявление ДНК сальмонелл в культуральной среде проводят без ее дополнительной обработки в соответствии с инструкцией к тест-системе.

13.2 Оценка идентичности ДНК микроорганизмов рода Salmonella, выделенных из различных источников


Исследования по оценке идентичности штаммов сальмонелл проводятся в соответствующих референс-центрах, региональных центрах по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности (в соответствии с приказом Роспотребнадзора от 17.03.2008 № 88 "О мерах по совершенствованию мониторинга за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней") на собственных базах или на базах других организаций, сотрудничающих с ними. При использовании тест-систем для типирования сальмонелл, разрешенных к применению на территории РФ в установленном порядке, допускается их использование на базе лабораторий ФГУЗ "Центров гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации. Результаты оценки идентичности штаммов должны получать эпидемиологическую интерпретацию только в рамках комплексного эпидемиологического расследования, так как в изолированном виде не могут свидетельствовать о эпидемиологической связи между источниками их выделения, а позволяют лишь исключить наличие такой связи. Для оценки идентичности ДНК микроорганизмов рода Salmonella используются молекулярно-генетических методики, обеспечивающие:

необходимую для исследований разрешающую способность (способность дифференцировки штаммов микроорганизмов, циркулирующих на данной территории);

межлабораторную воспроизводимость результатов исследований, отсутствие субъективизма при интерпретации их результатов

предпочтение должно отдаваться широко используемым в мире методикам, позволяющим провести сопоставление получаемых результатов с международными данными (мультилокусное секвенирование-типирование – MLST и его варианты, амплификация тандемных повторов с переменной копийностью – VNTR и его варианты, электрофорез в пульсирующем поле - PFGE, оценка полиморфизма длинны фрагментов амплификации – AFLP и др.). Желательно более широкое применение методик, позволяющих провести межлабораторное сравнение получаемых результатов исследования Не рекомендуется применение методик, обладающих низкой внутри- и межлабораторной воспроизводимостью – например, амплификации со случайными праймерами (RAPD).

При оформлении заключения по результатам оценки идентичности изолятов, должна быть представлена следующая информация:

количество, состояние полученных культур микроорганизмов;

краткое описание используемой методики с указанием используемого оборудования и программного обеспечения, при использовании метода прямого секвенирования – размеров и расположения анализируемых участков генома; при использовании методик, результаты которых имеют форму паттернов (VNTR, AFLP, PFGE) – графическое представление полученных результатов.

Организации, ответственные за проведение данных разделов работы, сохраняют образцы клинического материала и ООС, культуры микроорганизмов и результаты исследований в виде первичных материалов (файлы, полученные на детектирующих приборах) до оформления окончательного донесения об очаге инфекционного заболевания с групповой заболеваемостью, а при проведении комиссионной судебной экспертизы в рамках уголовного дела – до истечения срока обжалования решения суда.



1 представленный перечень оборудования может корректироваться с учетом рекомендаций производителей диагностических тест-систем и не включает оборудования, для проведения работ по типированию штаммов в связи с разнообразием используемых для этого методов.


2 Вместо цистеиновой пробы можно использовать унитиоловую, в которой цистеин заменен унитиолом. (Информационное письмо МЗ РСФСР № 10/11-3223 от 28.08.1987 г.)

1   2   3   4   5

Похожие:

Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconВременные методические указания к изучению санитарных
Настоящие Методические указания разработаны в соответствии с планом гкнт по проблеме
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания по дисциплине «физические основы оптической связи»
Методические указания разработаны кандидатом физико-математических наук, доцентом Нойкиным Ю. М
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания к спецкурсу «Основы психолингвистики»
Методические указания разработаны кандидатом филологических наук, доцентом кафедры русского языка Ф. Г. Самигулиной
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания по курсу «Ландшафты мира и проблемы природопользования» (часть 1) по специальности 013600 Геоэкология
...
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания по чтению текстов на испанском языке о древних культурах центральной и южной Америки для студентов философов и культурологов
Методические указания разработаны преп кафедры французского и испанского языков Родригес А. Э
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconУтверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды (методические указания)
Методические указания разработаны: Всесоюзным центром по сальмонеллам Центрального
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания по оценке подлинности и выявлению фальсификации молочной продукции
«Методические указания по оценке подлинности и выявлению фальсификации молочной продукции». Методические указания. – М.: Федеральный...
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания му 5 705-98 "Борьба с комарами, выплаживающимися в подвальных помещениях"
Методические указания разработаны для внедрения и применения Санитарных правил и норм СанПиН 5 541-96 "Требования к организации и...
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания разработаны на кафедре «Иностранные языки»
Английский язык. Грамматика. Сборник упражнений : методические указания для изучения грамматических основ английского языка для студентов...
Методические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии» iconМетодические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Разместите кнопку на своём сайте:
Библиотека


База данных защищена авторским правом ©tnu.podelise.ru 2013
обратиться к администрации
Библиотека
Главная страница