Утверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды (методические указания)




НазваниеУтверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды (методические указания)
страница2/12
Дата конвертации19.11.2013
Размер2.58 Mb.
ТипМетодические указания
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   12

4. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ


4.1. Подготовка материалов к исследованию.


Доставленные в лабораторию пробы высевают в пробирки (колбы) со средой обогащения и на

чашки Петри с дифференциально-диагностическими средами.


Исследуемый материал, высеваемый на чашки Петри, растирают шпателем по всей поверхности

среды.


Засеянные пробирки и чашки помещают в термостат при 37 °С на 16 - 20 ч.


4.1.1. Операционный и секционный материал массой не менее 20 г растирают в ступках и

высевают в одну из сред обогащения (предпочтительнее селенитовую или магниевую) в отношении

1:5. Допускается одновременный высев суспензии материала в среду обогащения и на

дифференциально-диагностические среды.


4.1.2. При диагностике сальмонеллезов животных исследуемый материал - паренхиматозные

органы (кроме печени), кровь, желчь, костный мозг, содержимое фолликулов яичников кур,

околоплодную жидкость абортированного плода, хориоаллантоисную жидкость и содержимое

желточного мешка замерших эмбрионов - высевают пастеровской пипеткой непосредственно на

чашки Петри с одной из дифференциально-диагностических сред (Приложение 3).


Печень (целиком или не менее 20 г) растирают в ступке с небольшим количеством

физиологического раствора; 0,1 г полученной суспензии высевают на дифференциально-

диагностические среды и одновременно на МПА и в МПБ.


В связи с тем, что S. abortusovis плохо растет на обычных питательных средах, высевы из

абортированных плодов овец необходимо делать также и на сывороточно-глюкозные среды.


При исследовании на сальмонеллоносительство животных и реагирующей по кровекапельной

реакции непрямой гемагглютинации (ККРНГА) птицы, выявленной в порядке эпизоотологического

надзора, суспензию материалов и органов высевают в одну из сред обогащения (п. 4.1.1).


Одновременно проводят микроскопическое исследование методом световой микроскопии.

Мазки-отпечатки делают из тех же органов и окрашивают по Граму.


4.1.3. Клинический материал высевают на две-три дифференциально-диагностические среды

(комбинируя высоко- и низкоселективные среды) и в пробирки со средой обогащения одновременно.


Испражнения, доставленные в фосфатно-буферном растворе, высевают в среду обогащения

двойной концентрации в соотношении 1:1. Фекалии, доставленные в глицериновом консерванте,

высевают на обычную среду обогащения в соотношении 1:5. Испражнения, доставленные без

консерванта, суспендируют в среде обогащения в соотношении 1:5. Из суспензии делают высев на

дифференциально-диагностические среды, оставшуюся часть инкубируют в термостате.


Кровь, взятую из вены, высевают в среду Рапопорт или 10 - 20-процентный желчный бульон в

соотношении 1:10. После 16 - 20 ч инкубирования делают высев на одну из селективных сред. При

отрицательном результате делают повторные посевы на 3-и, 4-, 6- и 10-е сутки.


Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.


Рвотные массы, осадки промывных вод желудка и мочи после центрифугирования высевают в

среды обогащения. В случае исследования материала без центрифугирования посев проводят в среду

обогащения двойной концентрации в соотношении 1:1 и после 16 - 20 ч инкубирования делают

высев на дифференциально-диагностические среды.


Каждую фракцию желчи (дуоденального содержимого) высевают во флаконы со

слабощелочным бульоном в соотношении 1:10 и на дифференциально-диагностические среды. Через

16 - 20 ч из флаконов осуществляют высев на дифференциально-диагностические среды. В случае

получения отрицательных результатов высев повторяют на 3-и, 5-, 7-е сутки, используя среды слабой

селективности. Спинномозговую жидкость высевают в желчный бульон для обогащения и на

слабоселективные среды.


4.1.4. При исследовании проб продуктов и кормов делают навеску массой 25 г.


Пищевые продукты, бактериологическое исследование которых проводят в соответствии с

требованиями "Микробиологических нормативов и методов анализа продуктов детского, лечебного и

диетического питания и их компонентов" (М., 1988), "Нормативов и методов микробиологического

контроля продуктов детского питания, изготовленных на молочных кухнях системы здравоохранения"

(М., 1988), "Медико-биологических требований к качеству продовольственного сырья и пищевых

продуктов" (М., 1989), берут для исследования в количестве, предусмотренном в указанных

документах.


Пробы пищевых продуктов высевают в предварительную среду обогащения в соотношении 1:5,

кормов - 1:5 - 1:10 в зависимости от способности к набуханию.


Продукты плотной консистенции гомогенизируют с небольшим количеством предварительной

среды обогащения, которую затем добавляют в количестве, обеспечивающем соотношение 1:5.


Крем, сливочное масло, мороженое и т.п. перед посевом расплавляют в водяной бане.


Жидкие объекты, имеющие кислую реакцию, перед посевом нейтрализуют 10-процентным

стерильным раствором бикарбоната натрия до слабощелочной реакции.


При исследовании яиц скорлупу обрабатывают спиртом и обжигают, после чего яйца

разбивают и отделяют желток в стерильную посуду, объединяя пять желтков одной пробы. Желтки

гомогенизируют и используют для посева.


Пробы мяса животных и птиц, яичного порошка, меланжа и консервы в закрытых банках

исследуют согласно действующим ГОСТам.


Пробы кормов в предварительной среде обогащения инкубируют 5 ч в термостате, после чего

взбалтывают, отстаивают. Надосадочную жидкость пересевают в соотношении 1:5 во вторую среду

обогащения (любая среда из приведенных в Приложении 3) и помещают в термостат. Разбухшие

корма растительного происхождения заливают второй средой обогащения так, чтобы она покрыла

поверхность пробы.


4.1.5. Смывы, помещенные в предварительную среду обогащения, инкубируют в термостате.


4.2. Операционный и секционный материал из среды обогащения после инкубирования в

термостате пересевают на дифференциально-диагностические среды.


Посевы проб продуктов и смывов в предварительной среде обогащения после инкубирования в

термостате пересевают во вторую среду обогащения: 10 мл среды, засеянной пробой продукта, вносят

в колбу с 90 мл второй среды обогащения, а в пробирку с посевом смыва добавляют 10 мл этой

среды.


Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.


Для исследования молока лучше использовать среду Мюллера.


При расследовании вспышек болезни целесообразно проводить параллельный высев

исследуемого материала на две среды обогащения.


Через сутки инкубирования в термостате делают высев из второй среды обогащения на

дифференциально-диагностические среды.


4.3. Посевы на дифференциально-диагностических средах инкубируют в термостате 18 - 20 ч

при температуре 37 °С, после чего просматривают невооруженным глазом или с помощью лупы в

проходящем дневном или искусственном свете (посевы на чашках Петри с висмут-сульфитным

агаром просматривают в падающем свете) и отмечают колонии, по морфологическим свойствам

похожие на сальмонеллезные.


При этом имеют в виду, что сальмонеллы на средах Эндо и Плоскирева растут в виде

прозрачных колоний, на среде Левина - голубоватых, на висмут-сульфитном агаре - черных колоний

с характерным металлическим блеском, при этом наблюдается прокрашивание в черный цвет участка

среды под колонией. Исключение составляют S. paratyhi A, S. choleraesuis, S. abortusovis, S. gallinarum-

pullorum и некоторые другие, которые при работе на висмут-сульфитном агаре образуют нежные

светло-зеленые колонии.


Подозрительные колонии (не менее трех) пересеивают в пробирки со скошенным МПА или

одной из комбинированных сред - Олькеницкого, Клиглера, Ресселя (Приложение 3).


В случаях чрезвычайной эпидемической ситуации при наличии подозрительных колоний в

посевах из продуктов и смывов параллельно с пересевом на комбинированную среду проводят высев

на МПА для последующей постановки реакции агглютинации. Результаты этой реакции

ориентировочны и требуют подтверждения на этапе завершения биохимической идентификации.


Одновременно изучают морфологию и тинкториальные свойства бактерий, готовя мазки и

окрашивая их по Граму.


При отсутствии подозрительных колоний чашки Петри с висмут-сульфитным агаром оставляют

в термостате еще на 24 ч, после чего просматривают и при обнаружении подозрительных колоний

продолжают исследование.


В противном случае работу с посевами прекращают.


4.4. Посевы на комбинированной среде инкубируют 16 - 20 ч при температуре 37 °С. Затем

изучают изменение среды.


Для дальнейшей работы отбирают колонии уреазонегативных бактерий, ферментирующих

глюкозу, не ферментирующих сахарозу и образующих сероводород. Такие культуры пересевают со

среды Олькеницкого в среду Гисса с маннитом, 1-процентную пептонную воду для определения

образования индола и в полужидкий агар для определения подвижности.


При высеве подозрительных колоний на МПА делают пересев в среды Гисса с глюкозой,

лактозой, сахарозой и маннитом, с сернокислым железом, с мочевиной, в 1-процентную пептонную

воду, полужидкий агар.


При высеве на среду Ресселя исключают пересев на среды Гисса с глюкозой и лактозой, при

высеве на среду Клиглера, кроме того, - на среду с сернокислым железом.


Дополнительно делают высев на МПА для постановки реакции агглютинации.


Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.


При обнаружении изменений комбинированной среды, позволяющих заподозрить наличие

сальмонелл, дальнейшее исследование материалов от человека проводят согласно таблице

(Приложение 4).


4.5. При выделении культур, имеющих ферментативные свойства, характерные для

представителей рода сальмонелл (Приложение 1), изучают их антигенную структуру в реакции

агглютинации на стекле с O- и H-агглютинирующими диагностическими сальмонеллезными

сыворотками (Приложения 5, 6), а также биовары (Приложение 10).


По результатам реакции агглютинации дают ответ, исследование прекращают.


4.6. Ход работы при исследовании различных материалов дан в схемах (рис. 1 - 6).


                             ----------------¬


                             ¦ Посев материала ¦


                             ¦   (1-й день)   ¦


                             L-------T--------


     --------------------------------+-------------------------------

¬


     \/                                                             

\/


-----------------¬ -------------------¬ -----------------------------

-----¬


¦ Среда обогащения ¦ ¦ Пересев (2-й день) ¦ ¦ Дифференциально-

диагностические ¦


¦ (инкубирование в + > ¦                   + > ¦ среды (инкубирование в

термостате ¦


¦ термостате 16 - ¦ ¦                   ¦ ¦              16 - 20

ч)          ¦


¦       20 ч)     ¦ ¦                   ¦

¦                                  ¦


L----------------- L------------------- L----------------T-----------

------


                                                         \/


                                        -----------------------------

-----¬


                                        ¦   Просмотр посева (2, 3-й

день)  ¦


                                        L----------------T-----------

------


                                        -----------------+-----¬


Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.


                                        \/                     \/


                                  ---------------¬     ---------------

-----¬


                                  ¦     Отбор     ¦     ¦ Отсутствие

роста  ¦


      ----------------------------+ подозрительных ¦     ¦  

подозрительных   ¦


      ¦                            ¦    колоний    ¦     ¦      

колоний      ¦


      ¦                            L---------------     L--------T-----

------


      ¦                                                         \/


      ¦                                                ---------------

-----¬


      ¦                                                ¦ Инкубирование

чашек ¦


      ¦                                                ¦ с висмут-

сульфитным ¦


      ¦                                                ¦ агаром в

течение  ¦


      ¦                                                ¦         24

ч       ¦


      ¦                                                L--------T-----

------


      ¦                                                         \/


      ¦                                                ---------------

-----¬


      ¦                        ------------------------+ Просмотр

посевов  ¦


      \/                      \/                      ¦    (3, 4-й

день)   ¦


-----------------¬      ---------------¬                L--------T-----

------


¦    Пересев на   ¦      ¦     Отбор     ¦                         \/


¦ комбинированные ¦ < ----+ подозрительных ¦                ---------------

-----¬


¦       среды     ¦      ¦    колоний    ¦                ¦ Отсутствие

роста  ¦


¦ (инкубирование ¦      L---------------                ¦  

подозрительных   ¦


Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.


¦       24 ч)     ¦                                     ¦      

колоний      ¦


L-----T-----------                                     L--------T-----

------


      \/                                                       ¦


-----------------¬                                              ¦


¦ Просмотр посевов ¦                                              ¦


¦ (3, 4, 5-й день) ¦                                              ¦


L-----T-----------                                              ¦


      L---T-------------------¬                                 ¦


          \/                  \/                               \/


--------------------¬   -----------------¬              ---------------

-----¬


¦ Наличие характерных ¦   ¦    Отсутствие   +------------ > ¦ Работу с

посевами ¦


¦   для сальмонелл   ¦   ¦   характерных   ¦              ¦    

прекращают     ¦


¦    биохимических   ¦   ¦ биохимических  ¦              L--------T-----

------


¦      изменений     ¦   ¦    изменений    ¦                       ¦


L---------T----------   L-----------------                       \/


          \/                                          ---------------

-----¬


--------------------¬   -----------------¬              ¦ Отрицательный

ответ ¦


¦ Пересев на набор  ¦   ¦ Биохимическая  +------------ > ¦   (3 - 6-й

день)   ¦


¦    сред согласно   ¦   ¦ и серологическая ¦              L--------------

------


¦    Приложению 4    +- > ¦ идентификация  ¦              ---------------

-----¬


¦   (инкубирование   ¦   ¦ (4, 5, 6-й день) ¦              ¦ Положительный

ответ ¦


¦        24 ч)       ¦   ¦                 +------------ > ¦   (4 - 6-й

день)   ¦


L--------------------   L-----------------              L--------------

------


Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.

1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   12

Похожие:

Утверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды (методические указания) iconМетодические указания Методические указания разработаны фгун «цнии эпидемиологии»
Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах
Утверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды (методические указания) iconМетодические указания му 1 1189-03 "Профилактика и лабораторная диагностика бруцеллеза людей"
Методические указания "Профилактика и лабораторная диагностика бруцеллеза людей" разработаны в помощь специалистам санитарно-эпидемиологических,...
Утверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды (методические указания) iconМетодические указания му 1097-02 "Лабораторная диагностика холеры"
Методические указания предназначены для специалистов бактериологических лабораторий центров госсанэпиднадзора, лечебно-профилактических...
Утверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды (методические указания) iconПояснительная записка к выполнению Плана Государственного ветеринарного мониторинга остатков запрещенных и вредных веществ в организме живых животных, продуктах животного происхождения и кормах за 2011 год. В 2011 году мониторинг
В 2011 году мониторинг мониторинга остатков запрещенных и вредных веществ в организме живых животных, продуктах животного происхождения...
Утверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды (методические указания) iconВопросы дли сертификационного экзамена по специальности клиническая лабораторная диагностика
Лабораторная диагностика анемий. Лабораторная диагностика острой постгеморрагической и железодефицитной анемий. Лабораторная диагностика...
Утверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды (методические указания) iconМетодические указания до практических занятий для студентов стоматологического факультета
Лабораторная диагностика стрептококковых инфекций. Кариесогенные стрептококки полости рта
Утверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды (методические указания) iconУтверждены Минздравом СССР социально-гигиеническое изучение формирования здоровья детей (методические рекомендации)
Сохранение и развитие здоровья детей составляет важнейшую государственную задачу
Утверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды (методические указания) iconУтверждены Приказом Госгражданстроя СССР от 11 декабря 1985 г. N 404
Утверждены Приказом Госгражданстроя СССР от 11 декабря 1985 г. N 404 по согласованию с Госстроем ссср, гупо мвд СССР и Минздравом...
Утверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды (методические указания) iconУтверждаю Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко 11 ноября 1986 г. N 4218-86 гигиенические требования к технологическим процессам получения и применения ванадия, его соединений и сплавов (методические указания)
Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологической службы, осуществляющей контроль за состоянием условий труда...
Утверждены Минздравом СССР лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды (методические указания) iconМетодические указания по га3охроматографическ0му измерению концентраций
Утверждены заместителем Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко 6 сентября 1983 г. N 2905-83
Разместите кнопку на своём сайте:
Библиотека


База данных защищена авторским правом ©tnu.podelise.ru 2013
обратиться к администрации
Библиотека
Главная страница