Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»




НазваниеМетодические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
страница4/6
Дата конвертации18.11.2013
Размер0.81 Mb.
ТипМетодические указания
1   2   3   4   5   6


Плазмида вирулентности кодирует белок наружной мембраны Yad A, являющийся ведущим адгезином иерсиний, а также белки наружной мембраны Yops и аппарат их секреции Ш типа Ysc (Yoр secretion), которые представляют собой комплекс факторов, участвующих в нейтрализации иммунного ответа макроорганизма. Аппарат секреции Ш типа Ysc позволяет иерсиниям вводить синтезируемые белки в цитоплазму клетки-мишени при тесном контакте с клеткой без проникновения в нее; включает не менее 28 белков.

Плазмида с молекулярной массой 82 МDа обнаружена только у Y._pseudotuberculosis 1 серотипа. Показано, что штаммы, имеющие плазмиду pVM 82 МDа, вызывают более тяжелое течение псевдотуберкулеза.


2. Материально-техническое обеспечение метода

Оборудование:

- стандартное оборудование для бактериологических лабораторий;

- стандартное оборудование для серологических лабораторий;

- стандартное оборудование для иммунологических лабораторий.

Диагностические наборы:

- сыворотки диагностические к Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis распространенных сероваров О-моновалентные кроличьи сухие для РА на стекле;

- сыворотка диагностическая к вирулентным Y. enterocolitica адсорбированная сухая кроличья для РА на стекле (СВИ);

- «Тест-система иммуноферментная для выявления антигенов иерсиний псевдотуберкулеза I серотипа»;

- наборы для ПЦР Yersinia pseudotuberculosis» и Yersinia enterocolitica;

- диагностикум латексный для выявления Yersinia pseudotuberculosis;

- диагностикум эритроцитарный псевдотуберкулезный антигенный сухой;

- диагностикум эритроцитарный кишечноиерсиниозный О:3 антигенный сухой;

- диагностикум эритроцитарный кишечноиерсиниозный О:9 антигенный сухой.


Питательные среды:

- питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза, рег. № 96/306/5;

- среда для определения чувствительности к антибиотикам (АГВ) (ФС 42-3521-98

- агар Хоттингера (МУК 4.1/4.2.588-96, с. 46);

- бульон Хоттингера (МУК 4.1/4.2.588-96, с. 45);

- пептон ферментативный, ГОСТ 138 05 – 76Е;

- питательная среда для выделения энтеробактерий сухая (ГНЦПМ, Оболенск), рег. № 98/306/5;


Химические реактивы:

- двузамещеный фосфорно-кислый калий (К2НРО4), ГОСТ 2493 – 75;

- фосфатно-солевой буфер, кат. № В – 60201;

- натрий хлористый, ГОСТ 4233 – 77;

- калия гидроокись (КОН), СТ СЕВ 1439 – 78;

- желчь очищенная, сухая, ТУ 480-00001927-24-93

- глюкоза, ГОСТ 975-88

- мочевина, 6691-77

- натрий щавелевокислый

- магний хлористый

- бромтимоловый синий воднорастворимый


3. Бактериологический метод


Порядок проведения бактериологического исследования


Одним из важнейших условий качественного проведения бактериологического исследования является правильный сбор материала и его подготовка к исследованию. Правила взятия и подготовки исследуемого материала представлены в таблице 4.

Схема проведения бактериологического исследования включает «обогащение» исследуемого материала при низкой температуре, использование дифференциально-диагностических сред для выделения и идентификации культур, определение их биотипа, серотипа, вирулентности.

Несмотря на низкую эффективность, прямой посев нативного материала на плотные питательные среды проводят, как правило, при подозрении на инфицированность иерсиниями продуктов питания и/или при групповых заболеваниях, вызванных употреблением (инфицированных) продуктов. Для этой цели эффективнее применение дифференциально-диагностическая среда для выделения иерсиний с бромтимоловым синим (СБТС).

При проведении «холодового обогащения» исследуемый материал в пептонно-калиевой среде (ПК) помещают в холодильник и выдерживают в нем до первого положительного посева, но не более 10 дней.

Высев на плотные питательные среды проводят со среды ПК на 2-3, 5-7 и 10 сутки. Высевы производят петлей из верхней трети слоя среды (но не с поверхности). Перед посевом содержимое пробирок не взбалтывают. При использовании среды Эндо и/или исследовании загрязненных проб, особенно при массовом поступлении, для ингибирования роста посторонней флоры, проводят щелочную обработку. Методика щелочной обработки основана на относительной резистентности иерсиний к щелочи по сравнению с другими микроорганизмами.


Методика щелочной обработки


Щелочная обработка проб проводится перед каждым высевом со среды ПК на плотную питательную среду. В лунки полистироловых планшетов для иммунологических реакций вносят по 0,2 мл свежеприготовленного 0,72 % раствора КОН в 0,5 % растворе NaCl и 0,2 мл исследуемого материала, перемешивают, выдерживают 1-1,5 минуты и высевают на СБТС или среду Эндо. Посевы инкубируют при (26±2) оС.

Просмотр выросших колоний проводят, как правило, через 48 ч, учитывая их морфологию (таблица 5).


Биохимическая идентификация


Видовую принадлежность выделенных культур устанавливают на основании комплекса типичных морфологических, культуральных, биохимических, антигенных и других свойств.

Для предварительного отбора используют стабильный биохимический признак – наличие уреазы. Положительный уреазный тест позволяет отличить иерсиний от других видов патогенных кишечных бактерий – шигелл, сальмонелл, эшерихий и др. Отсев подозрительных колоний проводят на скошенный столбик среды Олькеницкого штрихом и уколом в столбик. Как и иерсинии, бактерии рода Proteus гидролизуют мочевину, но они, в отличие от Yersinia, всегда расщепляют триптофан.

Ферментативная активность исследуется обычным способом на средах Гисса при 28 оС; подвижность в 0,3 % полужидком агаре и реакция Фогес-Проскауэра (среда Кларка) – при 25 и 37 оС.

Таблица 4

Материал для исследования и его подготовка

Вид исследуемого материала

Кол-во, сроки

Правила взятия, подготовка к исследованию бактериологическим методом и методом ИФА

Правила взятия, подготовка к исследованию в ПЦР

Материал от больных


Испражнения*

0,5-1,0 г на протяжении всего периода заболевания

Стерильной деревянной палочкой из судна;

ректальным зондом.

Поместить в 5,0 мл среды накопления (ПК).

В одноразовый контейнер с 5-10 мл забуференного физ. р-ра (ЗФР) рН 7,2-7,4, ложечкой, прилагаемой к контейнеру

Моча*

20-30 мл средней порции утренней мочи в первые 7 дней болезни

Засевается осадок после центрифугирования или отстаивания; для ИФА осадок исследовать нативно, затем поместить в 5,0 мл среды накопления

В одноразовый контейнер

Смыв из зева

В первые 3 дня болезни

Натощак с задней стенки глотки и корня языка тампоном, смоченным в физ. р-ре. Тампон поместить в 5,0 мл среды накопления

Тампон помещают в одноразовую пробирку с 5-7 мл ЗФР

Кровь

5-10 мл в первые 3 дня болезни

Стерильно из локтевой вены; сгусток измельчить, поместить 1 мл в 5,0 мл среды накопления

В одноразовую пробирку

Операционный или секционный материал


Аппендикулярные отростки

1,0-2,0 г

Стерильно измельчить, 1 мл суспензии поместить в 5,0 мл среды накопления

В одноразовую пробирку с 5-7 мл ЗФР

Мезентериальные лимфоузлы, др. органы и ткани

1,0-2,0 г

Стерильно измельчить, 1 мл суспензии поместить в 5,0 мл среды накопления

В одноразовую пробирку с 5-7 мл ЗФР

Желчь

1,0-2,0 мл

Собрать в пробирку 0,5-1,0 мл, поместить в 5,0 мл среды накопления




Содержимое кишечника

0,5-1,0 г

Собрать в пробирку 0,5-1,0 мл, поместить в 5,0 мл среды накопления

В одноразовую пробирку с 5-7 мл ЗФР

Сгусток крови

0,5-1,0 мл

Стерильно измельчить, 1 мл поместить в 5,0 мл среды накопления

В одноразовую пробирку с 5-7 мл ЗФР
1   2   3   4   5   6

Похожие:

Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный
Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный
Методические указания предназначены для органов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека,...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconФедеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Данное информационно-методическое письмо подготовлено специалистами Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconМетодические указания по лабораторной диагностике заболеваний, вызываемых Escherichia
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (И. В. Брагина, Е. Б. Ежлова, Ю. В. Демина,...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconИнструкция №7-3/06 по применению средства дезинфицирующего
Гуп «Московский городской центр дезинфекции» (гуп мгцд); фгун «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии»...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconМетодические указания му 1879-04 "Расследование поствакцинальных осложнений" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 4 марта 2004 г.) Дата введения: с момента утверждения
Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы, а...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconПриказ от 19 октября 2007 г. N 656 об утверждении административного регламента федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по исполнению
Об утверждении Положения о Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Собрание законодательства...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconПротокол №18 заседания Ученого совета Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconМетодические указания му 1 2486-09
Рекомендованы Комиссией по государственному санитарно- эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconПрав потребителей и благополучия человека
Рные правила, нормы и гигиенические нормативы, утвержденные Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия...
Разместите кнопку на своём сайте:
Библиотека


База данных защищена авторским правом ©tnu.podelise.ru 2013
обратиться к администрации
Библиотека
Главная страница