Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»




НазваниеМетодические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера»
страница5/6
Дата конвертации18.11.2013
Размер0.81 Mb.
ТипМетодические указания
1   2   3   4   5   6


* - высеваемость иерсиний наиболее высока в первые 3-5 дней болезни и до назначения антибиотиков



Вид исследуемого материала

Кол-во, сроки

Правила взятия, подготовка к исследованию бактериологическим методом и методом ИФА

Правила взятия, подготовка к исследованию в ПЦР

Материал от животных и птиц


Помет

0,5-1,0 г

Стерильной деревянной палочкой. Поместить в 5,0 мл среды накопления.

В одноразовую пробирку с 5-7 мл ЗФР

Тонкий кишечник

1,0-2,0 г

Забирают стерильно участок в месте перехода тонкой кишки в толстую с содержимым. Поместить в 5,0 мл среды накопления.

В одноразовую пробирку с 5-7 мл ЗФР

Брыжейка, мезентериальные лимфоузлы

1,0-2,0 г

Стерильно измельчить, 1 мл суспензии поместить в 5,0 мл среды накопления

В одноразовую пробирку с 5-7 мл ЗФР

Материал из внешней среды

Пищевые продукты1

25 г

Измельчить, поместить в среду накопления в соотношении 1:10, для посева использовать надосадочную жидкость.

В одноразовый контейнер ложечкой, прилагаемой к контейнеру

Овощи

10 штук каждого вида

Смыв одним влажным стерильным тампоном с поверхностей на границе здоровой и загнивающей части. Тампон поместить в 5,0 мл среды накопления

Тампон помещают в одноразовую пробирку с 5-7 мл ЗФР

Смывы с оборудования, инвентаря, тары

10 одноименных поверхностей

Одним влажным стерильным тампоном с поверхностей площадью 1002 см каждая. Тампон поместить в 5,0 мл среды накопления

Тампон помещают в одноразовую пробирку с 5-7 мл ЗФР

Гнезда грызунов

Примерно 10 г субстрата гнезд

Образец растереть в ступке с песком и фосфатно-буферным р-ром. 1,5 мл взвеси внести в 5 мл среды накопления

1,5 мл взвеси в одноразовую пробирку с 5-7 мл ЗФР

Вода из емкостей для хранения, вода открытых водоемов

Профильтровать через 0,22 мкм бумажный фильтр 1-2 л воды

Фильтры поместить в среду накопления.

Фильтры поместить в одноразовые контейнеры с 5 мл ЗФР

Почва

50-100 г

Помещают в среду накопления в соотношении 1:10, для посева использовать надосадочную жидкость.

В одноразовый контейнер ложечкой, прилагаемой к контейнеру с 5 мл ЗФР

Таблица 5

Характеристика колоний иерсиний на плотных питательных средах

Вид

Среда Эндо

Среда Хоттингера

СБТС

Примечание

24 часа

48 часов

24 часа

48 часов

24 часа

48 часов

Yersinia pseudotuberculosis

Колонии мелкие (росинчатые) круглые, выпуклые, блестящие, бесцветные

Колонии диаметром 0,1-0,2 мм, крупные, выпуклые, блестящие с ровными краями, бесцветные

Колонии диаметром 0,1-0,2 мм, голубовато-белые полупрозрачные с ровными краями, слизистые со слабоприподнятым центром (под микроскопом имеют вид пирамид или со сходящимися к центру гранями)

Колонии диаметром 0,2-0,5 мм, прозрачные с ровным краем. В полиморфной популяции – часть колоний бугристая с неровными фестончатыми краями

Колонии мелкие круглые, могут иметь слегка желтоватую окраску

Колонии диаметром 1 – 2 мм, голубовато-зеленоватые, с фестончатыми краями, выпуклые с приподнятым центром и суховатой матовой поверхностью на синем фоне среды

На СБТС через 48 ч колонии E. сoli – ярко-желтые, диаметром 2-3 мм, сочные, выпуклые; Sh. flexneri желтые, диаметром 1-2 мм сочные, плоские

Yersinia enterocolitica

Такие же

Такие же, но с розоватым оттенком

Колонии диаметром 0,1-0,2 мм до 0,5 мм, круглые, выпуклые с ровным краем, полупрозрачные с голубоватым оттенком мягкой консистенции

Колонии диаметром 0,3-0,5 мм более выпуклые, с ровным краем, прозрачные




Колонии диаметром 2 – 4 мм, голубовато-зеленоватые, выпуклые, сухие, с матовым налетом


Y. pseudotuberculosis отличаются от Y. enterocolitica по отношению к сахарозе и рамнозе.

Тесты расширенного биохимического ряда - ферментация ксилозы, сорбита, салицина и образование индола – позволяют определить биотип Y. enterocolitica.

В таблице 1 приведены основные биохимические тесты, позволяющие дифференцировать иерсиний от других микроорганизмов, имеющих с ними сходство, а также определить их видовую принадлежность и биотип Y. enterocolitica.


Серологическая идентификация


Серотипированию подлежат культуры, отнесенные по биохимическим свойствам к виду Y. enterocolitica и/или Y. pseudotuberculosis. Ее проводят с помощью реакции агглютинации на стекле по общепринятой методике с диагностическими сыворотками к Y._ enterocolitica серогрупп; О:3; О:4; О:4,32; О:4,33; О:5; О:5,27; О:6,30; О:6,31; О:7,8; О:9; О:13; О:13,7 и другие; к Y._pseudotuberculosis серотипов I и III.


Идентификация вирулентных иерсиний


Среди методов обнаружения вирулентных иерсиний для рутинной практики, наиболее адекватными являются:

  1. Фенотипические методы, основанные на выявлении признаков вирулентности, связанных с функционированием плазмиды pYV 42-48 МДа, прежде всего аутоагглютинации и кальцийзависимости роста иерсиний.

Определение способности к аутоагглютинации

Феномен аутоагглютинации проявляется при культивировании в жидкой среде и состоит в спонтанном склеивании клеток иерсиний.

Для посева используют чистые культуры иерсиний. Засевают 106-108 кл/мл в 2 пробирки со средой Кларка, одну из которых инкубируют при температуре (37±1) оС, другую - при (26±2) оС в течение 24-48 ч.

При положительном результате pYV+ иерсинии образуют рыхлый хлопьевидный осадок в первой пробирке (при (37±1) оС); во второй пробирке – равномерное помутнение, осадок чаще не большой, компактный. При отрицательном результате рост pYV- иерсиний создает в обеих пробирках равномерное помутнение среды, хлопья отсутствуют.

Определение кальцийзависимости роста иерсиний

Данное свойство проявляется в ограничении роста бактерий (бактериостаз), наступающем при дефиците ионов Са2+. Определение проводят на модифицированной среде АГВ (кальцийдефицитный агар) при температуре (37±1) оС. Исследуемые культуры инкубируют на бульоне Хоттингера при (26±2) оС в течение 24 ч, затем засевают на две чашки с кальцийдефицитным агаром, одну из которых инкубируют при температуре (37±1) оС, другую - при (26±2) оС в течение 48 ч.

При положительном результате pYV+ колонии, выросшие при температуре (37±1)_оС, значительно мельче (до 1 мм), чем при (26±2) оС, или отсутствуют (чаще у возбудителя псевдотуберкулеза). При отрицательном результате размеры pYV- колоний как при (37±1) оС, так и при (26±2) оС такие же, как на обычных средах.

При идентификации вирулентных иерсиний в качестве контрольных рекомендуется использовать референтные плазмидосодержащие штаммы Y. enterocolitica серотипов О:3; О:9 (№188 в коллекции ГИСК им. Л.А. Тарасевича и № КМ-33 (201) в коллекции РосНИПЧИ «Микроб»).

  1. Специфический агглютинационный тест, основанный на использовании антител к антигенам вирулентности иерсиний (БНМ), детерминируемым плазмидными генами.

Реакция агглютинации (РА) на стекле с сывороткой к вирулентным иерсиниям (СВИ) является экспресс-методом, позволяющим дифференцировать вирулентные pYV+ штаммы представителей рода Yersinia от авирулентных. Для постановки РА используют свежевыделенные культуры. Исследуемую культуру выращивают на чашке Петри или в пробирке со скошенным агаром Хоттингера при (37±1) оС в течение 18-24 ч и столько же при (26±2) оС. Далее постановка и учет реакции осуществляется по общепринятой методике (изложена в инструкции по применению).


4.4. Иммунологические методы выявления

специфических антигенов


Методы, направленные на выявление специфических антигенов, являются наиболее перспективными для ранней диагностики инфекций, обусловленных иерсиниями. Основное их преимущество – быстрота получения результатов при высокой чувствительности.

В настоящее время для выявления антигенов иерсиний в различных субстратах используются:

- «Диагностикумы коагглютинирующие псевдотуберкулезные и иерсиниозные» для реакции коагглютинации (РКоА), предназначенные для выявления микробных антигенов, а при подращивании - живых возбудителей в материале от больных (испражнения, моча, слюна) на первой неделе болезни, а также антигенов, связанных в составе иммунных комплексов.

- Диагностикум латексный для выявления Yersinia pseudotuberculosis «Псевлат» для реакции агглютинации латекса (РАЛ). Реакцию используют для выявления антигенов возбудителя псевдотуберкулеза в копрофильтратах больных и в смывах с объектов внешней среды.

- «Тест-система иммуноферментная для выявления антигенов иерсиний псевдотуберкулеза I серотипа».

Материал для исследования, сроки и правила его взятия представлены в таблице 4 (аналогично подготовке материала для бактериологического метода).

Исследования проб проводят в первые сутки их получения и затем на 3-5 сутки после подращивания при 4 оС в ПК среде. Непосредственно перед исследованием материал инактивируют 30 мин при (56±1) оС, центрифугируют при 3000 об/мин 15 мин и берут для исследования надосадочную жидкость. Постановку и учет реакции осуществляют в соответствии с инструкцией по применению.


4.5. Молекулярно-генетические методы


Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет выявить генетические детерминанты, локализованные на плазмиде вирулентности pYV или хромосоме, кодирующие ряд факторов патогенности.
1   2   3   4   5   6

Похожие:

Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный
Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный
Методические указания предназначены для органов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека,...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconФедеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Данное информационно-методическое письмо подготовлено специалистами Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconМетодические указания по лабораторной диагностике заболеваний, вызываемых Escherichia
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (И. В. Брагина, Е. Б. Ежлова, Ю. В. Демина,...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconИнструкция №7-3/06 по применению средства дезинфицирующего
Гуп «Московский городской центр дезинфекции» (гуп мгцд); фгун «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии»...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconМетодические указания му 1879-04 "Расследование поствакцинальных осложнений" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 4 марта 2004 г.) Дата введения: с момента утверждения
Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы, а...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconПриказ от 19 октября 2007 г. N 656 об утверждении административного регламента федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по исполнению
Об утверждении Положения о Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Собрание законодательства...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconПротокол №18 заседания Ученого совета Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconМетодические указания му 1 2486-09
Рекомендованы Комиссией по государственному санитарно- эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере...
Методические указания му 1 2438-09 Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Ю. В. Демина), фгун «Санкт-Петербургский нии эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» iconПрав потребителей и благополучия человека
Рные правила, нормы и гигиенические нормативы, утвержденные Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия...
Разместите кнопку на своём сайте:
Библиотека


База данных защищена авторским правом ©tnu.podelise.ru 2013
обратиться к администрации
Библиотека
Главная страница